Peganum harmala L. Материалы и методы

3

Peganum harmala L. (Peganaceae) - многолетнее травянистое растение, и оно долгое время использовалось в лечебных целях в качестве гербицида из-за присутствия гармин [19].

Peganum harmala размножается семенами, которые имеют очень короткий жизнеспособность [28]. Несмотря на то, что использование этого вида в медицине мало известно о системе размножения, генетической структуре популяции. Таким образом, оценка и поддержание его генетического разнообразия является обязательным условием. Молекулярные методы могут сыграть роль в раскрытии истории, оценке разнообразия, самобытности и структуры популяции, а также в понимании распределения и степени генетической изменчивости внутри и между видами [32].

В настоящем исследовании маркеры ISSR, ITS-RFLP, ITS-SSCP и SSR использовались для оценки генетического разнообразия в Peganum harmala. Маркеры Inter Simple Sequence Repsats (ISSR) доказали свою эффективность для популяционных генетических исследований и для изучения таксономических связей на уровне видов или ниже [7,14,16].

4

Материалы и методы

Растительные материалы

Всего было получено 12 образцов A. halimus из четырех популяций. Три популяции (1, 2 и 3) произрастают естественным образом в пустыне Египта в Западном Средиземноморье, а популяция 4 - внутри страны на плато Эль-Катамья (Таблица 1). Образцы были очень скудны, поэтому по три человека были отобраны из каждой популяции. Генетическое разнообразие 12 генотипов P. harmala было исследовано с использованием одного доминантного маркера; Межпростые повторения последовательностей (ISSR) и три ко-доминантных маркера; ПЦР-RFLP рДНК-ITS, ПЦР-SSCP рДНК-ITS и маркеры простого повторения последовательности (SSR).

Выделение ДНК и амплификации ISSR-PCR

ДНК экстрагировали из 100 мг семян с использованием мини-набора для экстракции ДНК I-Genomic Plant (INRTON), следуя инструкциям производителя.

5

Таблица 1
Расположение мест сбора популяций P. harmala и соответствующих географических координат в Египте.

6

ПЦР-SSCP амплификация

3 л продукта ПЦР (прибл. <850 п.н.) добавляли к 10 л раствора для денатурации (94% формамида, 0,05% ксилолцианола) и нагревали при 95 ° С в течение 5 минут, а затем внезапно помещали на лед. Образцы наносили на неденатурирующий полиакриламидный гель (GeneGel Excel 12, 5/24; Amersham Pharmacia Biotech). Электрофорез выполняли в терморегулируемой системе электрофореза (GenePhor; Amersham Pharmacia Biotech) при 6 ° C с первым прогоном.

при 600 В, 25 мА и 15 Вт в течение 10 минут, а затем при 600 В, 37 мА и 21 Вт в течение 3 часов. Гель окрашивали бромидом этидия и фотографировали при ультрафиолетовом освещении.

7

Статистический анализ

Размер аллелей измеряли с использованием программного обеспечения TotalLab версии 1.11 (Nonlin-Dynamics Dynamics Ltd., Дарем, США) в присутствии лестницы размером 1,5 т.п.н. Полосы представляли собой бинарные символы наличия (1) или отсутствия (0) для сборки матрицы фенотипов ISSR и количества общих полос (TB), количества полиморфных полос (PB) и процента полиморфных полос (PB%). были рассчитаны.