Өсімдіктер биотехнологиясынан тапсырма

Өсімдіктер биотехнологиясынан тапсырма

Суспензиялық өскінді өсіру тәсілдері.

Суспензия дақылдары - бұл сұйық ортада суспензияда өсірілген жеке жасушалар немесе жасушалар тобы.  Олар химиялық заттарға оңай түсетін жасушалардың біртекті популяциясы.

 Суспензия дақылдары қайталама метаболизм жолдарын, ферменттер индукциясын және ген экспрессиясын, бөтен қосылыстардың деградациясын, цитологиялық зерттеулерді және т.б.

 «Жақсы» сызықтың белгісі - белгілі бір өсіру жағдайында жасушалардың метаболизмді және жоғары репродукцияның қайта реттелу қабілеті.  Мұндай сызықтың морфологиялық сипаттамасы:

 бөлінудің жоғары дәрежесі (әр топқа 5-10 жасуша);

 жасушалардың морфологиялық біркелкілігі (кіші өлшемі, сфералық немесе сопақша пішіні, тығыз цитоплазмасы);

 трахеид тәрізді элементтердің болмауы.

 Жасуша суспензиясын каллус ұлпасын сұйық қоректік ортасы бар колбаға салу арқылы алады.  Суспензия шайқауыштағы колбада араластыру жылдамдығы 100 - 120 айн / мин.  Таза ортаға бірінші рет беру кезінде бастапқы каллус пен ірі агрегаттардың үлкен бөліктері 1-2 қабатты дәке, нейлон електері мен сәйкес саңылауы бар шприц арқылы сүзу арқылы жойылады.  Суспензия культурасын инициализациялау үшін 60-100 мл сұйық қоректік ортаға 2-3 г жаңа каллус культуралық массасы қажет.  Дегенмен, әрбір жасуша өсіру линиясында егу көлемі аз болады, оның кіші өлшемінде культура өспейді.

 Суспензиялы жасуша дақылдарының өсуін келесі параметрлердің біреуімен немесе бірнешеуімен бағалауға болады:

 1. Тұндырылған жасушалардың көлемі (ООК).  Суспензия культурасының аз көлемін 15 мл көлемді түтікке, жақсырақ конустық түтікке салыңыз.  Центрифугалау 5 минут ішінде 200 гр.  OOC - шөгінді көлемі суспензия көлемінен, әдетте%түрінде болатын мән.

 2. Ұяшықтар саны.  Ол Фукс-Розенталь камерасында есептеледі.

 3. Ылғал және құрғақ масса.  Жасушалық суспензия әлсіз вакуум астында Buchner шұңқырына салынған дымқыл және өлшенген сүзгі арқылы сүзіледі.  Жасушалар тазартылған сумен жуылады, су вакууммен сорылады және сүзгі арқылы қайтадан өлшенеді.  Құрғақ салмақ - дәл осылай анықталады, бірақ құрғақ сүзгі өлшенеді, ал жасушалар фильтрмен бірге термостатта 60 ° C температурада тұрақты салмаққа дейін кептіріледі.

 4. Ақуыздың құрамы.  Ақуызды анықтау үшін жасушаларды шыны талшықты фильтрге жинайды, 70% этанолдың қайнаған ерітіндісімен екі рет жуады, ацетонмен кептіреді және 1М NaOH -пен 85 ° C температурада бір жарым сағат бойы гидролиздейді.  Содан кейін Лоури бойынша ақуызды сүзіп, анықтаңыз.

 5. Орта өткізгіштігі.  Кондуктометр көмегімен анықталады.  Әдетте, бұл жасушалардың жаңа массасына кері пропорционалды.

 6. Жасушаның өміршеңдігі.  Цитоплазманың қозғалысын микроскоппен зерттей отырып, сондай -ақ өмірлік маңызды бояғыштарды (флуоресцеин диацетаты, тетразолий тұздары, Эванс көк) қолдану арқылы бағалаңыз.  Қолданар алдында инкубация буферінің рН, бояғыштың концентрациясы және инкубация уақыты реттеледі, тірі және өлген жасушалар қоспасы үшін калибрлеу қисықтары құрылады.