Алельний полiморфiзм гена MTHFR серед пацієнтів з iшемiчним iнсультом

КИЇВСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

ІМЕНІ ТАРАСА ШЕВЧЕНКА

Біологічний факультет

Кафедра загальної та молекулярної генетики

АЛЕЛЬНИЙ ПОЛІМОРФІЗМ ГЕНА MTHFR СЕРЕД ПАЦІЄНТІВ З ІШЕМІЧНИМ ІНСУЛЬТОМ

Курсова робота

студентки І курсу магістратури

денної форми навчання

Кучеренко Анастасії Михайлівни

Науковий керівник від кафедри

д.б.н., проф. Сиволоб А.В.

Робота виконана  у відділі геноміки людини Інституту молекулярної біології і генетики НАНУ

під керівництвом к.б.н., с.н.с. Кравченка С.А.

Київ – 2010 р.

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ

ВСА - внутрішня сонна артерія;

ЗЦГ – загальний циркулюючий гомоцистеїн;

ІХС – ішемічна хвороба серця;

кД – кілодальтон;

КТ – комп’ютерна томографія;

МРТ - магнітно-резонансна томографія;

МФЗ – мультифакторні захворювання;

ПААГ – поліакриламідний гель;

ПДРФ – поліморфізм довжини рестрикційних фрагментів;

ПЛР – полімеразна ланцюгова реакція;

п.н. – пара нуклеотидів;

СМА - середня мозкова артерія;

ССЗ - серцево-судинні захворювання;

т.п.н. – тисяча пар нуклеотидів;

dNTP – дезоксинуклеозидтрифосфати;

MTHFR - ген 5,10–метилентетрагідрофолат редуктази.

ЗМІСТ

ВСТУП..........................................................................................................................5

ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ

РОЗДІЛ 1. Характеристика інсульту як мультифакторної патології…………….7

1.1. Загальна характеристика інсульту……………….………………….7

1.2. Молекулярно-генетичні основи патогенезу інсульту…….………..8

1.2.1. Інсульт як мультифакторна патологія…………...………..............8

1.2.1.1. Фактори ризику розвитку інсульту………………………….…10

1.2.1.2. Генетичні підходи до вивчення інсульту мультифакторної природи………………………………………………………....10

1.2.1.3. Гени-кандидати схильності до розвитку інсульту…………....11

1.2.2. Роль гіпергомоцистеїнемії в розвитку інсульту………...............12

1.2.3. Ген MTHFR в якості фактора схильності до розвитку інсульту 13

ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНА ЧАСТИНА

РОЗДІЛ 2 Матеріали та методи дослідження.........................................................16

2.1. Матеріали дослідження………………………………...………..…16

2.1.1.Матеріали та реактиви …………………………………………....16

2.2. Методи дослідження………………………………...………….......17

2.2.1. Клініко-генеалогічний аналіз та формування вибірок.…….…..17

2.2.2.Виділення ДНК з лімфоцитів периферійної крові………………19

2.2.3.Розробка дизайну праймерів та оптимізація умов для проведення специфічної полімеразної ланцюгової реакції……….…………19

2.2.4. Ампліфікація ДНК in vitro………………………………………..20

2.3.Аналіз однонуклеотидної заміни в гені MTHFR…………………..22

2.3.1.Проведення аналізу поліморфізму довжини рестрикційних фрагментів………………………………………………………....22

2.3.2.ПЛР в реальному часі у варіанті TaqMan……………………..…22

2.4.Використання біоінформативних web-ресурсів та баз даних…….24

2.5. Статистична обробка отриманих результатів………………….…24

РОЗДІЛ 3 Результати та їх обговорення.................................................................26

ВИСНОВКИ...............................................................................................................35

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ...........................................................................................36