Ақуыздарды бөлу және тазарту

Стом-2002 Омиртайулы Еркебулан

Ақуыздарды бөлу және тазарту кезең-кезеңімен жүзеге асырылады.

1. Гомогенизация - бұл биохимиялық зерттеу объектілерін біртектес, яғни біртекті күйге дейін мұқият ұнтақтау, яғни белоктар жасуша қабырғасы бұзылғанға дейін мұқият ыдырайды.

Бұл жағдайда олар:

а) Уорринг түрі пышақ гомогенизаторлары;

б) Поттер-Элвегейм пистилі гомогенизаторлары;

в) шарикті және роликті диірмендер - тығызырақ заттар үшін;

г) мұздату және еріту кезектесіп жүру әдісі, ал жасуша қабырғасының жарылуы мұз кристалдары әсерінен жүреді;

д) «азот бомбасы» әдісі - жоғары қысым кезінде жасушалар азотпен қаныққан, содан кейін қысым күрт төмендейді, газ тәрізді азот бөлінеді, ол клетканы ішінен жарып жібереді;

е) ультрадыбыстық, әр түрлі пресс әдістері, жасуша қабырғаларын ферменттермен қорыту. Көптеген жағдайларда жылу гомогендеу кезінде пайда болады, ал көптеген белоктар инактивтелуі мүмкін, сондықтан барлық процедуралар салқын бөлмелерде t ° 0 ° температурада жүзеге асырылады немесе шикізат мұзбен салқындатылады. Сонымен бірге жасушалардың жойылу көлемі мен уақыты, жұмыс қысымы мұқият бақыланады. Идеал - бұл одан әрі экстракциядан өтуге болатын біртектес өнім.

2. Ақуыздарды бөліп алу, яғни оларды еріген күйге көшіру; көбінесе экстракция бір уақытта ұнтақтаумен бірге жүзеге асырылады. Экстракция:

а) 8-10% тұзды ерітінділерде еру;

б) рН-мен қышқылдан сәл сілтіліге дейінгі буферлік ерітінділерді қолдану (борат, фосфат, цитрат, трис - буфер: тризаминометанның NH2 - CH3 + HCl қоспасы;

в) ақуыздардың органикалық еріткіштермен тұнуы (этанол, метанол, бутанол, ацетон және олардың қосындылары), ал ақуыз-липид және ақуыз-ақуыз компоненттері деградацияға ұшырайды, яғни ЧСБ деструкциясы.

3. Ақуыздарды тазарту және фракциялау. Экстракциядан кейін қоспаны жекелеген белоктарға бөледі немесе бөлшектейді және оларды одан әрі тазартады:

а) тұздау - бұл белоктардың сілтілік және сілтілік-жер металдарының бейтарап тұзды ерітінділерімен тұндыру процесі.

Тұздау механизмі - қосылған аниондар мен катиондар ақуыздардың гидратталған ақуыз қабығын бұзады, бұл ақуыз ерітінділерінің тұрақтылық факторларының бірі. Көбінесе Na және аммоний сульфаттары ерітінділері қолданылады. Көптеген ақуыздар гидратация қабығының мөлшері мен заряд мөлшерімен ерекшеленеді. Әр ақуыздың өзіндік тұздану аймағы бар. Тұзды кетіретін затты алып тастағаннан кейін ақуыз өзінің биологиялық белсенділігі мен физико-химиялық қасиеттерін сақтайды. Клиникалық практикада тұздау әдісі глобулиндерді (аммоний сульфатының 50% ерітіндісі (NH4) 2SO4 қосқанда, тұнба түзілгенде) және альбуминді (100% аммоний сульфатының (NH4) 2SO4 ерітіндісі қосылғанда, тұнба түзілгенде) бөлу үшін қолданады.

Тұздану құндылығына мыналар әсер етеді:

1) тұздың табиғаты мен концентрациясы;

2) рН-орта;

3) температура.

Бұл жағдайда иондардың валенттілігі басты рөл атқарады. Демек, тұздың әсері μ ерітіндісінің иондық күшімен бағаланады: яғни ерітіндінің иондық күші (μ) әрбір ионның (С) концентрациясының оның валенттілік квадратына көбейтіндісіне тең (V).

Конның әдісі - тұзданудың бір түрі. Компоненттерді алу және тұндыру бір уақытта жүреді. Температураны (әдетте төмен t ° -0 + 8 ° C), ерітіндінің рН және концентрацияланған этанолды біртіндеп өзгерту, қан плазмасынан 18 протеин фракциясына дейін кезек-кезек оқшауланады.

Кон әдісі фармацевтикалық өндірісте қан алмастырғыштарды алу үшін қолданылады;

б) хроматографиялық әдістер. Орыс ғалымы Михаил Цвет (1903) талдаудың хроматографиялық әдістерінің негізін қалаушы болып саналады. Қазіргі уақытта оның көптеген түрлері бар. Әдіс заттардың бағанға салынған немесе тасымалдағышқа орналастырылған адсорбентте арнайы адсорбциялау қабілетіне негізделген. Бұл жағдайда талданған заттар бөлініп, қатаң анықталған адсорбент қабатында шоғырланады. Содан кейін баған арқылы тиісті элюенттер (еріткіштер) өткізіледі, олар адсорбция күштерін әлсіретеді және адсорбцияланған заттарды колоннадан жуады. Заттар фракциялық коллекторда жиналады.