Аппаратные методы иммунологических исследований

Реферат

по теме «Аппаратные методы иммунологических исследований»

1 Коагулометрические исследования

Коагулометрией называется метод исследования крови на гемостаз - совокупность функционально-морфологических и биохимических механизмов, обеспечивающих сохранение жидкого состояния крови, предупреждение и остановку кровотечений, сохранение целостности кровеносных сосудов. Иначе говоря, построение коагулограммы позволяет оценить скорость свертываемости крови пациента.

Исследование условно разделяется натри этапа, соотносящихся с тремя этапами свертывания крови, каждому из которых соответствуют собственные показатели:

I этап: сужение поврежденных кровеносных сосудов (по-другому «образование протромбиназы»);

II этап: агрегация тромбоцитов и формирование первичной пробки в месте нарушения целостности стенок сосудов («образование тромбина»);

III этап: «сплетение» эластичной сетки из нитей фибрина, накрывающую первичную пробку, цепляющуюся за края дыры и стягивающую её, после чего в ячейках сетки выстраиваются тромбоциты, что останавливает кровотечение (этот этап называется «свертывание фибрина»).

[pic 1]

Рисунок 1 – Свертывание крови

В стандартной коагулограмме определяются следующие показатели:

1) Протромбиновый индекс ПТИ (отношение времени свертывания контрольной плазмы ко времени свертывания плазмы пациента), %;

2) Международное нормализованное отношение (отношение значений протромбинового времени, полученного в результате анализа, к значениям протромбинового времени здорового человека). Протромбиновое время показывает, сколько будет сворачиваться плазма в секундах с добавленным к ней реагентом.

3) Уровень фибриногена в крови пациента;

4) Активированное частичное тромбопластиновое время (период времени, за которое появляется сгусток крови после того, как к плазме присоединяется хлорид кальция или другие реагенты);

5) Тромбиновое время (отражает скорость превращения фибриногена в фибрин под действием тромбина).

Аппарат, используемый для проведения коагулометрических исследований, называется коагулометром. По принципу действия такие аппараты делятся на:

1) Оптические - улавливают момент образования фибринового тромба по изменению способности кровяной пробы пропускать свет. Источник излучения (светодиоды) направляет свет на прозрачную кювету с богатой тромбоцитами плазмой. Нужно отметить, что анализы с непрозрачной кровью на таких приборах не производят. В момент добавления в неё реагентов начинается рост волокон фибрина, сгустки которого изменяют плотность смеси. Световой поток, проходящий сквозь кювету уменьшается. Фотоприемник фиксирует изменение оптической плотности, передает на процессор, который начинает отсчет времени коагуляции и анализирует данные. Результаты отражаются на индикаторе прибора.

2) Механические - определяют изменение скорости перемешивания смеси специальным шариком. Наибольшую достоверность результатов дают на пробах крови. Принцип основан на механическом действии образующегося сгустка крови на шарик, помещённый в кювету с пробой крови. Она находится в наклонном положении и вращается. Пока в кювету не добавлен реагент, шарик остается неподвижным. Под действием реагента начинается коагуляция, шарик, подхваченный сгустками крови, начинает вращаться, уходит от магнитного датчика, который регистрирует изменение магнитного поля как момент начала тромбообразования. В момент добавления последнего реагента от стартовой пипетки по кабелю передается сигнал для запуска работы механического гемокоагулометра.

[pic 2]

Рисунок 2 – Схема а) оптического коагулометра,

б) механического коагулометра

3) Экспресс - используют электрохимический способ анализа крови с помощью тестовой полоски. Капля крови из вены или артерии поступает по капиллярам полоски в зону реакции к реагентам, под влиянием которых начинается процесс коагуляции. Зона реакции связана электродами с источником напряжения. По мере тромбообразования сила тока, проходящего по электродам меняется, что фиксирует коагулометр. Обработка результатов выдается на индикатор прибора в виде показателей АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время), ПВ (протромбиновое время), и МНО (международное нормализованное отношение).