Метод введения взвеси микроорганизмов в желудочно-кишечный тракт крыс

Тургунов Е.М.

Аманова Д.Е.

Ивачёв П.А.

Лавриненко А.В.

Куанышев С.Р.

Метод введения взвеси микроорганизмов в желудочно-кишечный тракт крыс

Караганда, 2019

Явление бактериальной транслокации можно охарактеризовать как пассаж жизнеспособных бактерий из просвета кишечника во внутренние органы. Определение дано в 1979 г. Р. Бергом, и с тех пор интерес  к изучению феномена транслокации микроорганизмов экспоненциально возрастает с каждым годом [1].

При повреждении слизистой оболочки стенки кишки естественный интестинальный барьер теряет свою непроницаемость и специфичность, что в последствии приводит к изменению места дислокации микробной внутрипросветной флоры [2;6].

Бактериальная транслокация играет ключевую роль в патогенезе развития септических осложнений и бактериемии при многих заболеваниях, нередко локализующихся вне желудочно-кишечного тракта [3]. На сегодняшний день существуют различные диагностические методики определения транслокации микроорганизмов недостаточно визуализируют данный процесс, рутинные тесты на выявление бактериемии  часто дают ложноотрицательные результаты, не позволяющие в полном объеме оценить степень миграции бактериальных агентов и прогнозировать развитие генерализованной системной реакции и сепсиса [4].

Наиболее эффективным методом, визуализирующем механизмы миграции бактерий через проницаемую кишечную стенку является введение в организм экспериментального животного меченых штаммов облигатной кишечной флоры (например, штаммов Escherichia coli spp.) с дальнейшим отслеживанием пути их распространения при различных смоделированных патологических процессах. В литературе описываются различные методики и способы введения штаммов бактерий в организм для изучения транслокации и множества патофизиологических механизмов при микробной инвазии в эксперименте. Так, например, в исследовании Кувшинова А.Г. [2] методика введения меченых радиоактивным препаратом штаммов кишечной палочки заключалась в формировании фистульного отверстия в тонкой кишке и введением взвеси бактерий через синтетический катетер с наложением кисетного шва вокруг трубки.  Также подобный способ использован в других работах, как позволяющий доставить нужную концентрацию микроорганизмов в изучаемый отдел кишечника [5]. Данная методика не позволяет добиться абсолютной герметичности желудочно-кишечного тракта и условий стерильности, однако позволяет витально визуализировать процессы миграции. В других  исследованиях зарубежных авторов описаны методы  простого кормления животных с добавлением штаммов бактерий, однако данный метод сопряжён с риском подавления меченых штаммов собственной микрофлорой крыс, трудностью контроля нахождения в том или ином отделе кишки и отказом животного от пищи [6].

Для изучения процессов транслокации микроорганизмов нами предложен малоинвазивный способ введения взвеси меченых бактерий с помощью ороинтестинального зонда в желудочно-кишечный тракт экспериментального животного с визуализацией положения зонда через лапаротомный разрез.

В качестве ородуоденального зонда использовался зонд для энтерального питания «Well Lead», размер 6Fr/Ch (2,0 мм), длина 400 мм (рис. 1). Также для осуществления манипуляции необходимы полостные ножницы для лапаротомии и взвесь микроорганизмов в дозировке 1,5-2 мл в необходимом разведении.

[pic 1]

Рис.1 Набор инструментов для манипуляции

Методика введения отрабатывалась на 5 белых крысах-самцах сопоставимого пола и возраста. При осуществлении способа выполнялся следующий алгоритм:

1. Манипуляция проводится под общим обезболиванием раствором кетамина (калипсола) в дозе  0,15 мг/г массы тела животного. Наркотизация животного проводится внутримышечной инъекцией в верхней трети бедра. Общее обезболивание наступает через 15-16 мин после введения, продолжительность составляет 20 мин. Полный выход животного из наркоза наступает в среднем через 40 мин после операции.
2. Животное фиксируется на специальном планшете в положении на спине (рис.2)

[pic 2]

Рис.2 Фиксация животного на спине

1. Проводится подготовка операционного поля для лапаротомии: выстригается шерсть на вентральной поверхности тела в области предполагаемого доступа, в проекции средней линии живота, операционное  поле обрабатывается по стандартной хирургический методике растворами йода и спирта, обкладывается стерильным материалом (рис. 3).

[pic 3]

Рис.3 Подготовка операционного поля для лапаротомии

1. Линейным продольным разрезом длиной 2 см от области эпигастрия проводится верхне-срединная лапаротомия (рис. 4).

[pic 4]

Рис.4 Лапаротомный доступ к органам брюшной полости

1. Проводится замер необходимой длины зонда и глубины введения от передних резцов до начального отдела тонкой кишки. Ставим отметку несмываемым карандашом или маркером (рис. 5, 6).

[pic 5]

Рис.5 Измерение необходимой глубины введения зонда

[pic 6]

Рис.6 Отметка маркером измеренной величины

1. Произвести введение зонда через рот, при продвижении зонда необходимо зрительно контролировать местоположения кончика зонда в различных отделах желудочно-кишечного тракта. В данном случае для визуализации прохождения зонда через различные отделы желудочно-кишечного тракта кончик зонда оборудован светодиодом SMD 0805, получающим питание от аккумулятора (рис. 7, 8).

[pic 7]

Рис.7. Введение кончика зонда через рот крысы