Иммунно-ферментные реакции
Автор: sasha2306 • Ноябрь 12, 2018 • Реферат • 367 Слов (2 Страниц) • 320 Просмотры
1.2.4. Иммуноферментный анализ
Метод основан на применении ферментной метки, которая сшивается с антигеном или антителом. Фермент конъюгированный с иммунореагентом расщепляет добавленный субстрат с образованием легко детектируемых продуктов. Благодаря этому можно количественно учитывать образуемые комплексы Аг-Ат.
В качестве ферментных меток могут выступать: пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, каталаза, уреаза, фосфолипаза и др. Фермент, расщепляя субстрат, меняет интенсивность окраски реакции, которая прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.
Существует множество вариантов ИФА. По способу постановки реакции выделяют: твердофазный (гетерогенный) – ТИФА и гомогенный – ГИФА, а они в свою очередь имеют различные модификации.
При гетерогенном анализе антиген или антитело сорбируют на твердой фазе, а непрореагировавшие компоненты реакции удаляются многократным отмыванием.
Гомогенный иммуноферментный анализ применяют как правило для определения низкомолекулярных соединений и базируется на ингибировании активности фермента при его соединении с антителом или антигеном. При образовании комплекса антиген-антитело происходит восстановление активности фермента.
1.2.4.1. Конкурентные методы.
Метод конкурентного взаимодействия позволяет количественно определять антиген, который может быть получен в чистом виде. Антитело сорбируют на твердую фазу, а избыток удаляют отмыванием. Затем, добавляют известное количество фермент-меченного антигена и различное количество немеченого антигена. После инкубации, на твердой фазе оказываются комплексы Аг-Ат, избыток антигенов удаляют отмывкой, добавляют субстрат для фермента. По истечении определенного времени останавливают реакцию и проводят колориметрическое измерение продуктов ферментативной реакции. В противоположном варианте конкурентного ИФА на твердой фазе первично сорбируют антиген. Инкубацию проводят с мечеными и немечеными антителами. Количество продуктов ферментативной реакции обратно пропорционально концентрации растворенного антигена.
...