Essays.club - Получите бесплатные рефераты, курсовые работы и научные статьи
Поиск

Иммунно-ферментные реакции

Автор:   •  Ноябрь 12, 2018  •  Реферат  •  367 Слов (2 Страниц)  •  380 Просмотры

Страница 1 из 2

1.2.4. Иммуноферментный анализ

Метод основан на применении ферментной метки, которая сшивается с антигеном или антителом. Фермент конъюгированный с иммунореагентом расщепляет добавленный субстрат с образованием легко детектируемых продуктов. Благодаря этому можно количественно учитывать образуемые комплексы Аг-Ат.

В качестве ферментных меток могут выступать: пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, каталаза, уреаза, фосфолипаза и др. Фермент, расщепляя субстрат, меняет интенсивность окраски реакции, которая прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.

Существует множество вариантов ИФА. По способу постановки реакции выделяют: твердофазный (гетерогенный) – ТИФА и гомогенный – ГИФА, а они в свою очередь имеют различные модификации.

При гетерогенном анализе антиген или антитело сорбируют на твердой фазе, а непрореагировавшие компоненты реакции удаляются многократным отмыванием.

Гомогенный иммуноферментный анализ применяют как правило для определения низкомолекулярных соединений и базируется на ингибировании активности фермента при его соединении с антителом или антигеном. При образовании комплекса антиген-антитело происходит восстановление активности фермента.

1.2.4.1. Конкурентные методы.

Метод конкурентного взаимодействия позволяет количественно определять антиген, который может быть получен в чистом виде. Антитело сорбируют на твердую фазу, а избыток удаляют отмыванием. Затем, добавляют известное количество фермент-меченного антигена и различное количество немеченого антигена.  После инкубации, на твердой фазе оказываются комплексы Аг-Ат, избыток антигенов удаляют отмывкой, добавляют субстрат для фермента. По истечении определенного времени останавливают реакцию и проводят колориметрическое измерение продуктов ферментативной реакции. В противоположном варианте конкурентного ИФА на твердой фазе первично сорбируют антиген. Инкубацию проводят с мечеными и немечеными антителами. Количество продуктов ферментативной реакции обратно пропорционально концентрации растворенного антигена.

...

Скачать:   txt (6.1 Kb)   pdf (84.1 Kb)   docx (11.2 Kb)  
Продолжить читать еще 1 страницу »
Доступно только на Essays.club