Качественный анализ основных групп БАВ

МЕТОДИКИ

2.1. Качественный анализ основных групп БАВ

Для исследования качественного состава надземной части растения, составов фракций, а также для установления структур и чистоты выделенных соединений из растительного сырья использовались  методы:

•  экстракции разнополярными растворителями;
•  распределительного восходящего хроматографирования (одномерного и двумерного)  на бумаге марки FN 3 (Германия) в системах растворителей:

1. н-бутиловый спирт – уксусная кислота – вода (40:12.5:29);
2. н-бутиловый спирт – уксусная кислота – вода (4:1:5) верхняя фаза;
3. уксусная кислота (2-15 %);
4. ацетон;
5. вода-ацетон при соотношениях (9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8,1:9);
6. Гексан;
7. спирт-вода 9:1.

Для качественного анализа любых групп БАВ используют водные, водно-спиртовые или другие извлечения в минимальных количествах. Поскольку, извлечения представляют собой сложную сумму различных по природе веществ, не существует строго специфичных реакций их обнаружения. В связи с этим, видимые признаки реакций (изменение цвета, выпадение осадка и другие) не всегда однозначны. В таких случаях рекомендуется параллельное проведение нескольких реакций.

Для фитопрепаратов реакции могут быть более однозначными и селективными, в зависимости от их состава.

Хроматограммы просматривали в видимом и УФ-свете, а для их проявления использовали специфические реагенты: 1 % растворы хлорида алюминия, железо-аммонийных квасцов (ЖАК), о-толуидиновый и нингидриновый проявители.

При экстракции сырья, в методах колоночной, ТСХ, хроматографии на бумаге, для качественного анализа, разделения веществ и кристаллизации использованы следующие реагенты, растворители и специфические проявители:

1) NH3 - флавоноиды, фенольные соединения (желтое), оксиантрахиноны (розовое → карминово-красное), слизи (лимонно-желтое), флаваноны (желто-зеленое), халконы, ауроны (желтое, оранжевое,  красное), антоцианы (розовое, красное → серо-синее, фиолетовое), изофлавоны (желто-коричневое)

2) NaOH (3%) – антрахиноны, кумарины (розовое окрашивание);

3) Мочевина - кетозы, невосстанавливающие сахара (коричневые оттенки);

4) ЖАК (реакция Робертса и Вуда) - орто-диоксигруппировка любых феноль-ных соединений (зеленое), 3-рядовое расположение ОН-фенольных соединений, гидролизуемых дубильных веществ (синее → фиолетовое → черное), конденсированные дубильные вещества (черно-зеленое → черное), арбутин (темно-синее);

5)AlCl3 - ксантоны (зелено-голубое), флавоноиды, все типы полифенольных соединений с тремя рядовыми ОН-группами, или ОН С(О) ОН-фрагментом (ярко-желтое);

6) О-толуидин - полисахариды со свободной СООН-группой (красное окрашивание);

7) Реакция Запрометова 1% ванилин в HCl (конц) - любые фенольные соединения с мета-ОН (красное), пирокатехиновый фрагмент фенольных соединений (оранжевое), флороглюциновый фрагмент (красно-фиолетовое), флавоны (ярко-желтое), флаван-3,4-диолы (малиновое), эфиры катехинов (розовое), галлокатехины, катехины, дубильные вещества (красное);

8) FeCl3 - все фенольные соединения кроме тимола (зеленое, синее, фиолетовое – от расположения ОН-групп), кумарины, изокумарины (синее, фиолетовое), флавонолы (коричневое), 5-оксифлавоноиды (зеленое), терпин гидрат (окрашивание + бензол →синее);

9) Нингидрин - аминокислоты, аминосахара, алкалоиды с NH2 и  NH-группами, амины (розовое, сиреневое, синее, фиолетовое, желтое);

10) Раствор I2 - ненасыщенные кислоты (коричневое), крахмал (синее, сине-фиолетовое), кроме слизи и инулина, кумарины (коричневое), ксантоны (желто-коричневое);