ПТР- полимераздық тізбектік реакция
Автор: Beksultan Orazali • Сентябрь 19, 2021 • Реферат • 3,001 Слов (13 Страниц) • 762 Просмотры
Әл-Фараби атындағы Қазақ Ұлттық Университеті
[pic 1]
Биология және биотехнология факультеті
Медециналық биотехнология кафедрасы
СӨЖ №3
Тақырыбы: ПТР- полимераздық тізбектік реакция.
Орындаған: Оразәлі Бексұлтан
Тексерген: Тайпақова С.М.
Алматы,2021
Жоспар:
Кіріспе.
Негізгі бөлім
2.1. ПТР – этаптары
2.2. ПТР компоненттері
2.3. Праймерлер дизайны
2.4. Праймерлердің балқу температурасын есептеу
2.5. Кері транскрипция –полимераздық тізбектік реакция (КТ-ПТР)
2.6. Нақты уақыттағы ПТР
2.7. Ұялы ПТР
2.8. Ыстық стартты ПТР (Hot-start PCR)
Қорытынды
Пайдланылған әдебиеттер;
Кіріспе
1. Полимеразалық тізбекті реакция (ПТР) — биологиялық материалдағы анықталатын нуклеин қышқылдарындағы (ДНҚ) аз концентрациялы фрагменттердің айтарлықтай ұлғайтылуын қамтамасыз ететін молекулярлық биологиядағы эксперименталды әдіс.ДНҚ-ны амплификациялаудан басқа ПТР нуклеин қышқылдарына әр түрлі әсер етуге мүмкіндік береді (мутация, ДНҚ фрагменттерін тұтастыру). Сонымен қатар, ПТР биологиялық және медициналық практикада кеңінен пайдаланылады, мысалы, мирастық немесе инфекциялық ауруларды анықтау, әкелікті орнату, гендерді клондау, жаңа гендерді бөліп шығару, т.б.
ПТР әдісін 1983 жылы Кэри Мюллис жасаған, ол үшін Нобель сыйлығына ие болған. Қазіргі уақытта ПТР диагностикасы жыныстық жолмен берілетін жұқпалы ауруларды диагностикалаудың ең дәл, жедел және сезімтал әдістерінің бірі болып табылады.
Артықшылықтары
Жан-жақтылығы | ПТР кез-келген ДНҚ мен РНҚ-ны анықтауға мүмкіндік береді, тіпті басқа әдістер әлсіз болса да. |
Ерекшелігі | Бір материалда бірнеше патогенді зерттеуге болады. |
Сезімталдығы | Патогеннің генетикалық материалының бір фрагментін де осы әдіспен табуға болады. |
Жеделдік | Реакцияны орнату бірнеше сағатты алады, ал бүкіл диагноз ең көп дегенде бір күнді алады |
Дәлдік | Ауруды инкубация кезеңінде, аурудың клиникалық немесе зертханалық белгілері болмаған кезде диагноз қоюға болады. |
[pic 2]
Негізгі бөлім
2.1.Птр этаптары.
ПТР – ды екі кезеңге бөлуге болады:дайындық және негізгі. Бірінші кезеңде реакциялық қоспаны дайындау жүреді, басқаша айтқанда, барлық қажетті компоненттер бір түтікке жиналады. Бұл кезең түтіктердің санына және жинау әдісіне байланысты, әдетте бір сағатқа дейін созылады. Екінші кезеңде жүреді іс жүзінде ПТР, реакциялық қоспасы бар түтіктер арнайы құрылғыға салынып, бірнеше сағатқа қалдырылады (әдетте 3-5). Осы кезеңдердің әрқайсысын егжей-тегжейлі талдаймыз.
Дайындық кезеңі.
Реакция қоспасын дайындау үшін ПТР жұқа қабырғалы үшін арнайы жасалған көлемі 200 микролитрлі Эппендорф типті пробиркаларда дайындайды. Ол үшін барлық компоненттер қажетті соңғы концентрацияны алу үшін есептелген көлемде пробиркаларға дәйекті түрде қосылады.
[pic 3]
ПТР жүргізуге арналған Эппендорф типті арнайы жұқа қабырғалы пробиркалар.[pic 4]
Жоғарыда айтылғандай, ПТР модификацияланған репликация реакциясы болғандықтан, ДНҚ шаблонынсыз реакция мүмкін емес-бірнеше рет көшіруге қажетті фрагменті бар ДНҚ. Матрица кез – келген тірі ағзаның кез-келген ДНҚ молекуласы бола алады, ал концентрациясы өте төмен болуы мүмкін-ДНҚ-ның бірнеше көшірмесі.
...