Гель-фильтрация

Гель-фильтрация — метод разделения смеси веществ с различными молекулярными массами путем фильтрации через различные гели. Гель-фильтрация широко используется для определения величин молекулярных масс, обессоливания растворов нативных белков, концентрирования растворов полимеров.

Гель-фильтрация проводят на хроматографических колонках, заполненных набухшим гранулированным гелем.

Эффективность гель-фильтрации определяется размерами пор между гранулами геля и величиной ячеек каждой гранулы.

В медицине Гель-фильтрация применяют для диагностического разделения

белков сыворотки крови, например при макроглобулинемии,

гемоглобинопатиях, при ранней диагностике беременности, для получения

очищенных препаратов ферментов.

Выбирают колонки для гель-фильтрации по размеру. Выбор длины и диаметра колонки определяется объемом препарата и задачей, стоящей перед гель-фильтрацией в данном опыте.

Чаще всего их изготавливают из меди, нержавеющей стали, алюминия, латуни, стекла, кварца и тефлона. В металлических колонках могут проявляться нежелательные каталитические эффекты, особенно при высоких температурах. Однако этот недостаток компенсируется механической прочностью, устойчивостью к высоким температурам, высокой теплопроводностью.

Объем колонки можно выразить суммой трех слагаемых:

Vс = Vо+Vi+Vd

Где: Vо – мертвый объем – объем растворителя между частицами сорбента (объем подвижной фазы);

Vi – объем пор, занятый растворителем (объем неподвижной фазы);

Vd – объем матрицы сорбента без учета пор.

Полный объем растворителя в колонке Vt представляет собой суммy объемов подвижной и неподвижной фаз:

Vt= Vо + Vi

Связь между удерживаемым объемом и молекулярной массой (или размером молекул) образца описывается калибровочной кривой .

При обессоливании, смене буфера и рассортировке молекул объем препарата может составлять 20-25% полного объема колонки. Отношение высоты