Анаэробный распад глюкозы
Автор: Дарья Лабынько • Декабрь 17, 2018 • Лекция • 1,471 Слов (6 Страниц) • 455 Просмотры
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ
Кафедра биохимии
ОТЧЁТ ПО КУРСУ «МЕТАБОЛИЗМ УГЛЕВОДОВ»
Выполнили:
студенты 4 курса 51 группы
специальность «биохимия»
Проверила:
старший преподаватель кафедры,
Зырянова Татьяна Николаевна
Минск,2018
АНАЭРОБНЫЙ РАСПАД ГЛЮКОЗЫ (ГЛИКОЛИЗ)
Анаэробный процесс расщепления глюкозы происходит в цитозоле клеток и приводит к расщеплению одной молекулы глюкозы на две молекулы молочной кислоты. Процесс сопровождается освобождением энергии, которая аккумулируется в форме АТФ.
Изучение гексокиназной активности
Процесс гликолиза начинается с фосфорилирования глюкозыза счет АТФ. Эта реакция катализируется ферментом гексокиназой:
гексокиназа, Мg2+
АТФ + глюкоза АДФ + глюкозо–6–фосфат[pic 1]
Реактивы:
1.0,1 M раствор Nа2HPO4, рН 7,4.
2.0,9% раствор NaCl.
3.1,15% КС1 раствор.
4.0,154 М раствор MgSO4.
5. Глюкоза — 2.10-2М раствор.
6.АТФ — 1.10-2М раствор
7.6% раствор трихлоруксусной кислоты.
8.Реактивы для определения глюкозы с антроном.
Растворы АТФ и глюкозы готовят на фосфатно-солевой смеси, рН 7,4.
Фосфатно–солевая смесь, рН 7,4:
0,1 M раствор Nа2HPO4, рН 7,4. –20мл;
0,9% раствор NaCl –20мл;
1,15% КС1 раствор –1мл;
0,154 М раствор MgSO4 –0,25мл
Ход работы:
Экстракты дрожжей инкубируют в фосфатно-солевой смеси, содержащей глюкозу, Mg и АТФ. Об интенсивности гликолиза судят по убыли глюкозы.
Схема опыта:
№ пробы | Состав пробы | Время инкубации, мин | |||
Глюкоза ,мл | АТФ, мл | Тканевый экстракт, мл | MgSO4, мл | ||
1 | 0,5 | 1 | 1,3 | 0,2 | – |
2 | 0,5 | 1 | 1,3 | 0,2 | 10 |
3 | 0,5 | 1 | 1,3 | 0,2 | 20 |
4 | 0,5 | 1 | 1,3 | 0,2 | 30 |
Заполнение проб реакционной смесью проводят на льду.
Вначале экстракт добавляют в пробы 1 и 2, в которых определяют
исходное количество глюкозы (пробы «до инкубации»). После добавления экстракта и перемешивания реакционной смеси, осаждают белки, добавляя равный объем трихлоруксусной кислоты. Осадок белка удаляют фильтрованием или центрифугированием.
После этого экстракт ткани добавляют в пробы 3-6, пробы закрывают
и инкубируют 15 мин (3, 4) и 30 мин (5, 6) при 30°С. После инкубации
пробы 3–6 ставят в лед и осаждают белки, добавляя равный объем
трихлоруксусной кислоты. Осадок белка удаляют фильтрованием или
центрифугированием.
В пробах определяли содержание глюкозы глюкозооксидазным методом.
Глюкозооксидазный метод.
Метод основан на следующих ферментативных реакциях:
GOD
Глюкоза + Н2О+О2 глюколактон+Н2О2[pic 2]
POD
Н2О2+фенол+4-аминоптерин хинонимин+ 4Н2О2[pic 3]
Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации глюкозы и измеряется фотометрическим методом.
...