Физиология и генетика бактерий

ВОЕННО-МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

кафедра микробиологии

           “ УТВЕРЖДАЮ”

    НАЧАЛЬНИК КАФЕДРЫ

полковник медицинской службы

------------------------------ СБОЙЧАКОВ В.Б.

“----” ----------------------- 199--- года

ПЛАН-КОНСПЕКТ

проведения лабораторного занятия по микробиологии на ФПВ

N 4

Тема:

“ФИЗИОЛОГИЯ И ГЕНЕТИКА БАКТЕРИЙ”

                       Санкт-Петербург-1996 г.

Цель занятия : Научить курсантов методам выделения чистых культур аэробов и анаэробов и их идентификации путём изучения ферментативных свойств.

I. УЧЕБНОЕ ВРЕМЯ (2 часа).

II. ВВЕДЕНИЕ (5 мин).

На заключительном этапе выделения аэробов и анаэробов бактериолог отбирает различные виды колоний, выросших на плотной питательной среде при первичном посеве исследуемого материала, с целью накопления чистых культур для последующей их идентификации по видам, вариантам.

Устойчивость ферментативных признаков бактерий позволяет использовать биохимические свойства бактерий в сочетании с их морфологическими, культуральными и другими признаками для определения видов и вариантов.

Для обнаружения ферментов исследуемую культуру микробов засевают на специальные дифференциально-диагностические питательные среды в пробирках (макрообъёмная технология) или в лунки планшетов для иммунологических исследований (микрообъёмная технология).

III. КОНТРОЛЬ ИСХОДНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ КУРСАНТОВ (10 мин)

Решение письменных задач по следующим вариантам вопросов:

1. Что такое колония.

2. Что такое “чистая культура” микроорганизма.

3. Методы выделения “чистых культур” микроорганизмов.

4. среды Гисса - “пестрый” ряд, для какой цели применяется, принцип работы.

5. Методы выявления ферментов бактерий.

6. Схема выделения и идентификации культур.

1. Колония микроорганизма - обособленное скопление микробов на плотной питательной среде. Чаще всего колония развивается из одной микробной клетки, т.е. является чистой культурой этого микроорганизма. Колонии оценивают по:

а) величине - крупные - 4-6 мм в диаметре и больше; средние - 2-4 мм; мелкие - 1-2 мм; карликовые или точечные - менее 1 мм;

б) форме - правильная, неправильная, круглая, амёбевидная, корневидная, сферическая, розеткообразная;

в) цвету - бесцветные, белые, желтые, розовые, красные и т.д.;

г) прозрачности - прозрачные, непрозрачные;

д) характеру поверхности - гладкая, шероховатая, бугристая, блестящая, матовая, сухая, влажная;

е) характеру контура, края колонии - фестончатый, волнистый, зазубренный, бахромчатый, ровный, истонченный, изрезанный;

ж) рельефу колонии - куполообразные, плоско-выпуклые, конусообразные с приподнятой серединой и валиком по переферии, с вдавленным центром, плоские, стелющиеся по поверхности, врастающие в агар;

з) консистенции - сухая, крошащаяся, слизистая, сливкообразная.

Типы колоний: R (шероховатая); S (гладкая, поверхность влажная); M (слизистая).

2. Чистой культурой называют скопление микробов одного вида на плотной или жидкой питательной среде. Потомство одной единственной клетки (клон).

3. Для изучения свойств микробов необходимо получить их чистые культуры, т.е. свободные от всех других типов микроорганизмов. С этой целью одну клетку отделяют от всех остальных и культивируют так, чтобы вся формирующаяся популяция оставалась бы изолированной. Для этого применяются несколько методов.

Чистые культуры микроорганизмов, за редкими исключениями, выделяют на поверхности или внутри твёрдой питательной среды.

Аэробные бактерии выделяют по методу Коха - рассеивают суспензию по поверхности среды в чашках Петри или применяют менее трудоёмкий метод - размазывают каплю петлёй по агаризованной среде. В противоположность клеткам в жидкой среде клетки на поверхности или внутри плотной питательной среды утрачивают подвижность. Поэтому, если достаточно малое количество клеток поместить в плотную питательную среду или на её поверхность, из каждой клетки вырастет изолированная колония. Идеальным образующим гель субстратом для большинства микробиологических сред является агар-кислый полисахарид, экстрагируемый из некоторых красных водорослей, 1,5-2% суспензия растворяется в воде при 100о С, формируя прозрачный раствор, превращающийся в гель при 45о С. Таким путём стерильный раствор агара можно охладить до 50о С, добавить бактерии, а затем быстро охладить ниже 45о С, чтобы образовался гель. Когда агар застынет, клетки  оказываются иммобилизированными внутри него и образуют в процессе роста колонии.