Болезнь Борна

       2.1 Болезнь Борна

       Исследования электронной микроскопии негативно окрашенных инфекционных частиц изолята вируса болезни Борна (БДВ) показали, что вирионы имеют сферическую морфологию с диаметром 90 ± 10 нм, содержащую внутреннее электронно-плотное ядро ​​(50-60 нм) (Рисунок 1).

[pic 1]

       Рисунок 1 - Отрицательный контраст микрофотография частиц вируса болезни Борна

       Virion Mr и S20, w неизвестны.  Частично очищенные инфекционные частицы BDV имеют плавучую плотность в CsCl 1,16-1,22 г см-3 в сахарозе 1,22 г см-3 в ренографине 1,13 г см-3.  Инфекция вируса быстро теряется при термообработке при 56 ° C.  Вирионы относительно стабильны при 37 ° C, и только минимальная потеря инфекционности наблюдается после 24-часовой инкубации при 37 ° C в присутствии сыворотки.  Вирионы инактивируются ниже рН 5,0, а также путем обработки органическими растворителями, детергентами и воздействием УФ-излучения.  Инфективность полностью и быстро разрушается хлорсодержащими дезинфицирующими средствами или обработкой формальдегидом.

       Геном состоит из одной молекулы линейной, отрицательной смысловой ssRNA размером около 8,9 kb и Mr около 3 × 106).  Геном РНК не полиаденилирован.  Экстразисторные последовательности встречаются на концах 3 '(лидер) и 5' (трейлер) генома BDV.  BDV 3'-концевые геномные последовательности имеют высокое содержание A + U с отношением U / A около 2: 1.  Концы РНК генома BDV проявляют частичную инвертированную комплементарность.  Полноразмерные плюс-цепные (антигеномные) РНК присутствуют в инфицированных клетках и в вирусных рибонуклеопротеинах.  Дефектные РНК не были идентифицированы в BDV-инфицированных клетках и тканях.  BDV можно разделить на два подтипа на основе полных последовательностей геномов нескольких штаммов BDV.  С уникальным исключением штамма No / 98 все изоляты BDV на сегодняшний день (независимо от года, изоляция видов и площади) имеют приблизительно 95% гомологии на уровне nt (подтип 1), тогда как штамм BDV No / 98 показывает только 85-  86% -ная идентичность последовательности по сравнению с другими штаммами BDV (подтип 2).  Изменения nt распределены достаточно равномерно по всему геному BDV.  Тем не менее, все штаммы предсказывают ту же самую геномную организацию BDV и отличаются только одним nt в абсолютном размере генома.

       Шесть основных ORF обнаруживаются в последовательности генома BDV (рисунок 2).  Эти ORF кодируют полипептиды с предсказанным размером 40 кДа (p40), 24 кДа (p24), 10 кДа (p10), 16 кДа (p16), 56 кДа (p56) и 180 кДа (p180) соответственно.  Основываясь на своих положениях в вирусном геноме и численности в инфицированных клетках и вирионных частицах вместе с их биохимическими и последовательностными признаками, полипептиды p40, p24 и p16 BDV соответствуют вирусному нуклеопротеину (N), активатору транскрипции фосфопротеина (Р) и  матричные (М) белки, соответственно, обнаружены в других отрицательных ssRNA-вирусах.  В BDV-инфицированных клетках обнаружены две изоформы BDV N (p39 и p38).  Эти две формы вирусного N, по-видимому, кодируются двумя различными видами мРНК.  Дифференциальное использование двух внутрикадровых инициирующих кодонов, присутствующих в гене p40 BDV, также может способствовать производству BDV p39 / 38.  BDV p39 содержит как сигнал ядерной локализации (NLS), так и ядерный экспортный сигнал (NES), тогда как p38 содержит только NES.  BDV p24 представляет собой кислый полипептид (предсказанный I.P. 4.8), который имеет высокое содержание Ser-Thr (16%), с фосфорилированием в сериновых остатках, которое опосредуется как протеинкиназой C, так и казеинкиназой II.  Эти признаки согласуются с характеристиками активатора транскрипции фосфопротеина (Р), обнаруженного в других вирусах ssRNA с отрицательным смыслом.  BDV p24 содержит двудольную NLS в последовательности.  В дополнение к P полипептид (P ') 16 кДа также транслируется из второго внутрикадрового AUG-кодона в P ORF.  Дополнительная ORF, p10, кодирует полипептид 10 кДа, присутствующий в клетках, инфицированных BDV.  BDV X начинается в одном и том же блоке транскрипции мРНК, 46 nt выше по потоку от p24 и перекрывается, в другом кадре, с 71 N-терминалом aa p24.  Недавнее исследование показывает, что BDV X содержит NLS в N-конце последовательности.