Методы проведения исследований
Автор: Yrysbek99 • Ноябрь 11, 2019 • Реферат • 1,004 Слов (5 Страниц) • 409 Просмотры
1.2 Методы проведения исследований
Работа проводилась на базе Научно-исследовательской платформы сельскохозяйственной биотехнологии» АО «Казахский агротехнический университет им. С. Сейфуллина».
При проведении исследований применялись паразитологические, иммунохимические, биотехнологические, молекулярно-генетические, статистические и другие методы исследований.
В работе использовали животных: хомяки. При планировании и проведении экспериментов с участием лабораторных животных ориентировались на международные законы и правила, в которых отражены критерии гуманного обращения, содержания и кормления: Международные руководящие принципы для биомедицинских исследований с участием животных, 2012 г (International Guiding Principles for Biomedical Research Involving Animals); Европейская конвенция о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей, 2005 г (European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and Other Scientific Purposes); Приложение А Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей; Руководство для размещения и ухода за животными, 2006 г (APPENDIX A of the European convention for the protection of vertebrate animals used for experimental and other scientific purposer).
Химические и биологические препараты:
Стеклянную посуду очищали от загрязнения ершами механическим путем, ополаскивали водой и обрабатывали хромовой смесью (хромпиком) 2-3 часа. Промывали водопроводной водой (не менее 10 раз) и ополаскивали 8-10 раз дистиллированной водой. Вымытую посуду сушили в сухожаровых шкафах (60-80°С) и стерилизовали при 180°С – 2-3 ч. Пластиковую посуду и расходные материалы использовали однократно.
Отбор рыб, зараженных метацеркариями O. felineus. Для обнаружения метацеркариев в тканях рыбы использовали компрессионный метод. Для этой цели исследовали по 5 проб мышц с подкожной клетчаткой с обеих сторон рыбы: по 3 пробы из спинной и 2 из брюшной части. Каждая проба мышц бралась с площади 1-2 см2 на глубине 2-3 мм. Мышечную ткань измельчали и порциями по 1-1,5 г раскладывали либо в компрессории, либо между двумя стеклами размером 6-8×12-15 см. Готовые компрессионные препараты просматривали под бинокуляром при увеличении в 16 раз.
Определение жизнеспособности метацеркариев осуществляли с помощью морфологического метода и метода определения подвижности личинки.
При первом методе выделенные из ткани рыбы метацеркарии переносили в каплю физиологического раствора на предметное стекло, осторожно накрывали покровным стеклом и исследовали сначала под малым, а затем под большим увеличением микроскопа. Признаком гибели личинок являлось только грубые изменения структуры, явное нарушение целостности оболочек цисты, зернистый распад ее содержимого; разрушение экскреторного пузыря. В случае использования второго метода для провокации двигательной активности метацеркариев был использован трипсин. На выделенные из тканей метацеркариев наслаивали несколько капель 0,5%-ного раствора трипсина, приготовленного на физиологическом растворе. Жизнеспособные метацеркарии уже через 10-15 сек начинали выходит из цист. Рыбы, содержащие жизнеспособные метацеркарии, были использованы для инвазирования хомяков.
Заражение хомяков. Пятнадцать сирийских хомячков (Mesocricetus auratus) возрастом 8-10 недель находятся в хороших гигиенических условиях в виварии Казахского агротехнического университета им. С. Сейфуллина (KATU), и их использование и уход были одобрены Комитетом по этике животных Факультет ветеринарной медицины КАТУ. Все процедуры выполнены в соответствии с Кодексом этики Всемирной медицинской ассоциации (Хельсинкская декларация) для экспериментов на животных http://ec.europa.eu/environment/chemicals/lab_animals/legislation_en.htm. Хомяки были разделены на две группы: 1 группу (10 голов) орально инфицируют 50 метацеркариями дигенетических сосальщиков, изолированными в тот же день, а 2 группу используют как контроль (5 голов). Инфицирование хомячков подтверждается методом копроовоскопии [38]. На 40-й день после инфицирования, хомяков анестезируют с помощью СО2, а взрослые трематоды выделены из их печени для морфологических и молекулярно-генетических исследований.
...